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它是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)老搭檔

發(fā)布時(shí)間:

2021-11-24


概要:

原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)不能缺少老搭檔——離心機(jī)?。將酶解后的組織液過尼龍網(wǎng)膜,去除未充分消化的組織碎片,選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次,離心去除碎片(一般采取50-100 g,離心機(jī)離心1-2 min左右),最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中??蓞⒖家韵路椒▉斫档驮|(zhì)體懸液中的碎片占比

  原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)不能缺少老搭檔——離心機(jī),它可以說是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)必備儀器了。

  原生質(zhì)體制備提取作用有五點(diǎn):

  1.細(xì)胞融合。

  2.原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá):亞細(xì)胞定位,蛋白和核酸相互作用。

  3.利用膜片鉗技術(shù)研究離子通道及原生質(zhì)體在受光、脅迫和激素作用后的調(diào)節(jié)機(jī)制的研究。

  4.細(xì)胞壁再生、細(xì)胞分裂與分化、攝入細(xì)胞器、病毒侵染機(jī)理、膜透性及離子轉(zhuǎn)運(yùn)等基礎(chǔ)理論研究的理想材料。

  5.被用來作為研究植物細(xì)胞鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的理想材料。

  由此可見原生質(zhì)體純化的重要性。下面以植物為例,進(jìn)行簡單講解:

  纖維素酶和果膠酶能分解植物細(xì)胞壁,形成原生質(zhì)體;加入0.6mol/l甘露醇的目的是維持原生質(zhì)體正常的形態(tài),防止原生質(zhì)體吸水脹破;不同植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同,則原生質(zhì)體結(jié)構(gòu)不同;原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)由細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核組成。

  將酶解后的組織液過尼龍網(wǎng)膜,去除未充分消化的組織碎片,選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次,離心去除碎片(一般采取50-100 g,離心機(jī)離心1-2 min左右),最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中??蓞⒖家韵路椒▉斫档驮|(zhì)體懸液中的碎片占比:

  1. 提前優(yōu)化樣本,比如剝?nèi)ネ馄ぃ▋H限于研究對(duì)象不包含外皮部分的樣本)、棄去質(zhì)地堅(jiān)硬的組織和損傷組織。

  2. 降低離心機(jī)離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,去除留在上清中的碎片。

  3. 如果原生質(zhì)體起始量足夠大,可考慮通過流式分選去除碎片。

  以上就是關(guān)于離心機(jī)在原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用,如果您還想了解更多有關(guān)離心機(jī)的信息,可以多多關(guān)注上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司。


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